Пример: Транспортная логистика
Я ищу:
На главную  |  Добавить в избранное  

Биология /

Белки: история исследования, химсостав, свойства, биологические функции

←предыдущая следующая→  
... 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 



Скачать реферат


условий реакции. В клинической лабораторной практике реакции осаждения используют для выделения альбуминовой и глобулиновой фракций белков плазмы крови, количественной характеристики их устойчивости в плазме, обнаружения белков в биологических жидкостях и освобождения от них с целью получения безбелко-вого р-ра.

Обратимое осаждение.

Под действием факторов осаждения белки выпадают в осадок, но после прекращения действия (удаления) этих факторов белки вновь переходят в растворимое состояние и приобретают свои нативные свойства. Одним из видов обратимого осаждения белков яв-ляется высаливание.

Высаливание. Насыщенным р-ом сульфата аммония осаждается альбуминовая фракция белков, полунасыщенным р-ром – глобулиновая фракция.

Сущность реакции заключается в дегидратации молекул белка.

Реактивы: 1)неразведенный яичный белок; 2) насыщенный р-р сульфата аммония; 3) NaOH, 10% р-р, 4) CuSO4, 1% р-р; 5) дистл-ая вода; 6)сульфат аммония в порошке.

Ход определения. В пробирку наливают 30 капель неразв-го яичного белка и добав-ляют равное количество насыщенного р-ра сульфата аммония. Содержимое пробирки пе-ремешивают. Получают полунасыщенный р-р сульфата аммония, при этом глобулиновая фракция осаждается, а альбуминовая остается в р-ре. Последнюю отфильтровывают, затем смешивают с порошком сульфата аммония до тех пор пока не прекратится раств-ие соли, при этом выпадает осадок – глобулины.

Необратимое осаждение белков.

Необратимое осаждение белков связано с глубокими нарушениями структуры белков (вторичной и третичной) и потерей ими нативных свойств. Такие изменения белков можно вызвать кипячением, действием конц. р-ров минеральных и органических к-т, солями тя-желых металлов.

Осаждение при кипячении.

Белки являются термолабильными соединениями и при нагревании свыше 50-60С денатурируются. Сущность тепловой денатурации заключается в разрушении гидратной оболочки, разрыве стабилизирующих белковую глобулу связей и развертывании белковой молекулы. Наиболее полное и быстрое осаждение происходит в изоэлектрической точке (когда заряд молекулы равен нулю), поскольку частицы белка при этом наименее устой-чивы. Белки, обладающие кислыми свойствами, осаждаются в слабокислой среде, а белки с основными свойствми – в слабощелочной. В сильнокислых или сильнощелочных р-рах денатурированный при нагревании белок в осадок не выпадает, т.к. его частицы переза-ряжаются и несут в первом случае положительный, а во втором – отрицательный заряд, что повышает их устойчивость в р-ре.

Реактивы: 1) яичный белок, 1% р-р; 2) уксусная к-та, 1% и 10% р-ры; 3) NaOH, 10% р-р.

Ход определения. В 4 пронумерованные пробирки приливают по 10 капель р-ра яич-ного белка. Затем 1-ю пробирку нагревают до кипячения, при этом р-р мутнеет, но т.к. частицы денатурированного белка несут заряд, они в осадок не выпадают. Это связано с тем, что яичный белок имеет кислые свойства ( его изоэлектрическая точка 4,8) и в ней-тральной среде заряжен отрицательно; во вторую пробирку добавляют 1 каплю 1% р-ра уксусной к-ты и нагревают до кипячения. Белок выпадает в осадок, т.к. его р-р прибли-жается к изоэлектрической точке и белок теряет заряд ( один из факторов устойчивости белка в р-ре); в 3-ю пробирку добавляют 1 каплю 10% р-ра уксусной к-ты и нагревают до кипения. Осадка не образуется, т.к. в сильнокислой среде частицы белка приобретают положительный заряд ( сохраняется один из факторов устойчивости белка в р-ре); в 4-ю пробирку наливают 1 каплю р-ра NaOH, нагревают до кипения. Осадок не образуется, поскольку в щелочной среде отрицательный заряд белка увеличивается.

Осаждение концентрированными минеральными к-тами.

Концентрированные кислоты (серная, хлористоводородная, азотная и др.) вызывают денатурацию белка за счет удаления факторов устойчивости белка в р-ре (заряда и гид-ратной оболочки). Однако при избытке хлористоводородной и серной к-т выпавший осадок денатурированного белка снова растворяется. По-видимому, это происходит в результате перезарядки молекул белка и частичного их гидролиза. При добавлении избытка азотной к-ты растворения осадка не происходит. Вот почему для определения малых количеств белка в моче при клинических исследованиях применяется азотная к-та.

Реактивы: 1) яичный белок,1% р-р; 2) конц. серная к-та; 3) конц. хлористоводородная к-та; 4) конц. азотная к-та.

Ход определения. В три пробирки наливают по 5 капель концентрированной серной, хлористоводородной и азотной к-т. затем, наклонив пробирку под углом 45, осторожно по стенке наслаивают такой же объем яичного белка. На границе двух слоев появляется оса-док белка в виде белого кольца. Осторожно встряхивают пробирки, наблюдают раство-рение белка в пробирках с серной и хлористоводородной к-тами, в пробирке с азотной к-ой растворения белка не происходит.

Осаждение органическими к-ами.

Трихлоруксусноая к-та осаждает только белки, а сульфосалициловая осаждает не только белки, но и высокомолекулярные пептиды. Сульфосалициловой к-ой пользуются при определении белка в моче.

Реактивы: 1) яичный белок, 1% р-р; 2) трихлоруксусная к-та, 10% р-р; 3) сульфосалициловая к-та, 10% р-р.

Ход определения. В две пробирки вносят по 5 капель р-ра белка. В одну из них при-бавляют 2 капли сульфосалициловой к-ты, а в другую – 5 капель трихлоруксусной к-ты. В пробирках выпадает осадок белка.

Осаждение белка солями тяжелых металлов.

Белки при взаимодействии с солями свинца, меди, ртути, серебра и других тяжелых металлов денатурируются и выпадают в осадок. Однако при избытке некоторых солей наблюдается растворение первоначально образовавшегося осадка. Это связано с накоп-лением ионов металла на поверхности денатурированного белка и появлением положи-тельного заряда на белковой молекуле.

Реактивы: 1) яичный белок, 1% р-р; 2) сульфат меди, 10% р-р; 3) ацетат свинца, 5% р-р; 4) нитрат серебра, 5% р-р.

Ход определения. В три пробирки вносят по 5 капель белка. В первую добавляют 1 каплю ацетата свинца, в третью – 1 каплю нитрата серебра. Во всех пробирках выпадает осадок. Затем в первую пробирку добавляют 10 капель нитрата серебра – растворения осадка нет.


←предыдущая следующая→  
... 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 



Copyright © 2005—2007 «Mark5»